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【明美光電】TIRF為加強顯微熒光影像軸向解析度之一種光學技術，此技術最適用于觀察貼近蓋玻片表面區(qū)域之熒光樣本，實現(xiàn)熒光顯微鏡觀察細胞膜相關生理作用，及活體外單分子交互作用之研究等。由于此類樣本所需觀察的z軸范圍僅約100 nm厚，即易受離蓋玻片表面較遠區(qū)域所產(chǎn)生之熒光訊號干擾，影響觀察范圍的影像清晰度。

TIRF 熒光顯微鏡利用物理光學全內反射原理，使用可調整入射角度之雷射光源，配合高孔徑值之物鏡，使雷射光由物鏡入射至樣本時，在蓋玻片與樣本介質(主要為水溶液)之交界面，產(chǎn)生光學全內反射現(xiàn)象。此現(xiàn)象使光源不至于穿透交界面而激發(fā)整體樣本，只有距蓋玻片表面厚度不到200 nm的范圍內之區(qū)域為受激發(fā)范圍，且受激強度隨著與蓋玻片表面之距離呈等比級數(shù)下降。因受激發(fā)的范圍大量減少，此技術可避免非焦面之樣本產(chǎn)生發(fā)散熒光，故能解決非焦面熒光雜光之問題，達到光學切片之清晰化效果。

熒光顯微鏡TIRF技術研發(fā)由來已久，早在1981即有第一篇相關論文發(fā)表。經(jīng)多年發(fā)展，在雷射導引光路設計、雷射角度調整、物鏡NA值、適用之浸油及蓋玻片等各方面均不斷改良。